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実習紹介：応用バイオ化学実験 遺伝子発現実験2（2/3）
GFP遺伝子が発現した大腸菌からDNAを抽出し、電気泳動で解析しました。
大腸菌の細胞壁を溶解するリゾチーム（溶菌酵素）処理やアルカリ・SDS（洗剤のような界面活性剤）処理、さらにフェノール抽出（除タンパク質）、エタノール沈殿（濃縮）を経てDNAを抽出しました。
得られたDNA（プラスミドDNA）をアガロースゲル電気泳動で確認します。プラスミドDNA以外にゲノムDNAやRNAも含まれています。続いてRNase（RNA分解酵素）処理、制限酵素処理により、プラスミドDNAが導入したDNAであることを電気泳動で調べます。
大きさが分かっているDNAマーカーの電気泳動プロファイルから標準曲線（検量線）を片対数方眼紙を用いて作成し、DNAのサイズを測定します。GFP遺伝子が含まれているプラスミドDNAが上手く大腸菌に導入されていると推定されました。
使用したNaOH, SDS, 酢酸, フェノール, エタノールなどの試薬は、試薬特級を用いました。
★本実験で使用した変異原性物質（EtBr）は外部委託により焼却廃棄。フェノール等の使用済試薬も外部委託にて法令を遵守して処理しています。
遺伝子発現実験3につづく
【使用した試薬・機器】
試薬特級: 富士フィルム和光純薬株式会社
制限酵素（EcoRI, SalI, BstEII）: タカラバイオ株式会社
アガロース SeaKem® MEアガロース: Lonza
Mupid アガロースゲル電気泳動装置: 株式会社Mupid
トランスイルミネーター・ゲル撮影装置 : ATTO株式会社
ハンディ型長波長(365 nm)UVランプ: フナコシ株式会社
簡易型LED紫外線照射（一般市販品）
文責：大藤道衛（非常勤講師）
